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        血球計數板的步驟是什么?需要注意哪些?

        瀏覽: 發表時間:2022-10-05 09:52:10

        血球計數板的步驟是什么?需要注意哪些?
        細胞計數法是計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。 一般用計數板(血細胞計數板)進行。 即,既可以用于計數分離(分散)細胞培養接種前制備的細胞懸液中的細胞數,也可以用于計數培養物的細胞數。 無論計數對象如何,都需要制備分散的細胞懸液。
        一.步驟
        1、制備細胞懸液:對懸液培養的細胞可以直接進行以下步驟2 (計數和計算過程)。 如果計數對象是貼壁生長的細胞,首先需要將培養物按以下步驟制備成細胞懸液。
        1 )、停止培養,吸出培養液,用PBS洗滌培養物一次。
        2 )、在培養瓶中加入0.25%胰蛋白酶溶液1mL,37消化3~5min。 在此期間我一直在鏡子下觀察。 當細胞變圓接近脫壁時丟棄消化液。
        3 )、一定量的培養液:(這些培養細胞不再有用時,加入PBS),用吸管噴入,使細胞脫離貼壁制成細胞懸液。
        2、計數和計算過程
        1 )細胞計數板中央放置計數專用蓋玻片。
        2 )用玻璃虹吸管抽吸細胞,使虹吸管流出蓋玻片上或下計數板上的凹坑,等待蓋玻片充滿液體。
        3 )顯微鏡下計數方形大方眼內細胞總數。 壓線的細胞只計入上線和左線,對于細胞團,按每個細胞計數。

        4 )細胞懸液密度計數如下。 細胞密度=(4個大格細胞總數/4)104個/ml。


        二、注意事項:
        1 )一定要分散在單個細胞中,清點樣品前,充分攪拌細胞懸液。
        2 )顯微鏡計數,遇到兩個以上細胞組成的細胞團,應當用單個細胞計算。如果細胞團10%表示細胞分散不充分。


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